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產品詳情
操作說明
注意事項
產品簡介
PEI 40K Transfection Reagent（線性化聚乙烯亞胺轉染試劑），是一種以線性化聚乙烯亞胺為主體、分子量為40000的高電荷陽離子聚合物，其本身帶正電，可以有效的結合帶負電的核酸，與之形成復合物，并導入到細胞中，適用于細胞的質粒DNA轉染。PEI 40K（線性化聚乙烯亞胺）轉染試劑細胞毒性低，轉染效率高且成本低，相較于脂質體類轉染試劑，性價比極高。目前已經驗證線性PEI 40K轉染試劑廣泛適用于多種細胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela細胞等，轉染效率高達80%~90%。本產品主要成分PEI 40K濃度為1 mg/mL。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；4℃保存，有效期至少6個月；長期不用可-20℃保存更長時間，避免反復凍融。
組成
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Component |
G1802-1ML |
G1802-10ML |
|
PEI 40 K Transfection Reagent |
1 mL |
10×1 mL |
|
產品說明書 |
1份 | |
操作步驟
1. 貼壁細胞轉染前準備工作（6孔板為例，其他規格參考附表）：
a) 轉染前一天，將細胞以合適的密度均勻種植于孔板中，以正式轉染時細胞匯聚至70-85%為宜；
b) 轉染前，去除原細胞培養基，用PBS清洗1-2次后，更換1.8 mL不含血清或者低血清（5%以下）的基礎培養基，或Opti-MEM；不同細胞對于血清依賴性不同，根據具體細胞種類調整。
c) 將換好液的細胞放置于培養箱中，并開始配制轉染復合物。
2. 懸浮細胞轉染前準備工作：
a) 轉染當天，將適量的細胞，離心去除培養基后，用不含血清或者低血清（5%以下）的基礎培養基重懸；
b) 將準備好的懸浮細胞放置到培養箱中，并開始配制轉染復合物，轉染復合物和培養基之間的體積比，可以參考貼壁細胞的比值，進行適當調整。
3. 轉染復合物準備：
a) 配制A液：100 μL不含血清的基礎培養基與2 μg質粒DNA，吹吸混勻；
b) 配制B液：100 μL不含血清的基礎培養基與6-8 μL PEI 40 K Transfection Reagent，吹吸混均；
c) 將B液加到A液中，輕輕吹打混均，室溫孵育15 min，使其形成DNA-PEI轉染復合物。
4. 轉染細胞：
a) 將上一步得到的轉染復合物，以畫十字或者環繞的方式，滴加到之前換好液的孔板中；
b) 手持孔板在平面上畫“8”字或其他的方式輕搖培養板，使其混合充分，置于37℃，5% CO2培養箱中孵育；
c) DNA-PEI轉染復合物與細胞共同孵育4-6 h即有較好的轉染效率，適當延長或過夜孵育，轉染效率更佳。
注意事項
1. 請使用狀態良好的健康細胞，復蘇的細胞建議至少傳代2次后再進行轉染。
2. 請使用高質量、無內毒素的質粒DNA。
3. 轉染時高濃度血清以及抗生素的使用，可能會影響細胞狀態以及轉染效率。
4. 不同的細胞耐受性、敏感性不一樣，轉染孵育時間長短，以及PEI/DNA使用比例，可視情況酌情調整。
5. 操作時請穿實驗服，佩戴一次性手套。
附表：不同細胞培養容器轉染使用量（僅供參考）
|
培養器皿 |
生長面積 （cm2） |
接種細胞數 |
DNA量 （μg） |
PEI （μL） |
轉染復合物體積 （μL） |
總體積 （mL） |
|
96孔板 |
0.3 |
(2-4)×104 |
0.1 |
0.3-0.4 |
10 |
0.1 |
|
24孔板 |
1.9 |
(1.2-2.4)×105 |
0.5-1 |
1.5-4 |
50 |
0.5 |
|
12孔板 |
3.8 |
(2.4-4.8)×105 |
1-2 |
3-8 |
100 |
1 |
|
6孔板 |
9.5 |
(6-10)×105 |
2-4 |
6-16 |
200 |
2 |
|
10 cm培養皿 |
55 |
(4-6)×106 |
12-24 |
36-96 |
1000 |
12 |
|
T75培養瓶 |
75 |
(6-10)×106 |
18-36 |
54-144 |
1000 |
15 |
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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