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產品簡介
本產品紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer,或稱ACK Lysis Buffer),是一種經典的用于去除紅細胞的裂解液,在不損傷有核細胞的前提下充分去除紅細胞。經紅細胞裂解液裂解得到的組織細胞中不含紅細胞,可進一步用于原代培養、細胞融合、流式細胞分析、核酸與蛋白的分離及提取等。其基本原理是利用細胞內滲透壓濃度差而導致細胞膜脹破的原理裂解紅細胞。主要成分包含氯化銨、碳酸氫鉀、EDTA-Na2。因銨根離子無法通過細胞膜,而其他離子可以通過,造成細胞內外的離子濃度差異,外部水分擴散至細胞內,使紅細胞膨脹,達到裂解效果。本產品經0.2 μm濾膜過濾除菌。
儲存與運輸
冰袋(wet ice)運輸;4℃保存,有效期12個月。
使用方法
組織細胞樣品:
1. 新鮮組織經胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液,離心棄去上清液;
2. 按1:3-5比例向細胞沉淀中加入紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2 min;
3. 800-1000 rpm離心5-8 min,離心棄去上層紅色清液;
4. 收集沉淀部分,加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次;
5. 如裂解不完全可重復步驟2和3;
6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞,用于后續實驗;如提取RNA,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液。
血細胞:
1. 新鮮抗凝血,離心棄去上清液;
2. 按1:6-10比例向細胞沉淀中加入紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-5 min;
3. 800-1000 rpm離心5-8 min,離心棄去上層紅色清液;
4. 收集沉淀部分,加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次;
5. 如裂解不完全可重復步驟2和3;
6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞,用于后續實驗;如提取RNA,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液進行。
注意事項
1. 本品經過濾除菌,使用時請注意無菌操作,避免細菌污染。
2. 后續試驗如是用于細胞培養,操作過程中應注意在超凈工作臺中完成,并注意無菌操作,以免細胞被污染,影響細胞培養。
3. 在離心洗滌后,如發現極微量的紅細胞,可繼續試驗,不會影響后續檢測。
4. 操作時請穿實驗服,佩戴一次性手套。
本產品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
合肥萬物生物科技有限公司
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