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產品詳情
操作說明
注意事項
產品簡介
IP裂解液是一種在非變性條件下裂解細胞或組織制備蛋白樣品的裂解液。經本裂解液裂解組織或細胞得到的蛋白樣本，可應用于PAGE，western blot，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)、ChIP（Chromatin Immunopre-cipitation）和ELISA等實驗。
本產品主要成分為25 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA及1% NP-40。可適用于動物或植物組織及細胞樣品，也可用于真菌或細菌樣品。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；4℃避光保存，有效期12個月。
使用方法
自備蛋白酶抑制劑。IP裂解液在臨用前需加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白降解。以下使用方法中提到的IP裂解液均指已添加蛋白酶抑制劑。
對于組織樣品：
1. 組織塊用預冷PBS洗滌，去除血污，剪成細小碎塊置于勻漿器中。
2. 加入10倍組織體積IP裂解液低溫勻漿。注意，IP裂解液的使用量可按照約每50 mg組織與1 mL裂解液的比例添加。如組織蛋白含量較低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白濃度。
3. 將勻漿液轉移至1.5 mL離心管中，振蕩。冰浴30 min，期間每10 min用移液器反復吹打，確保組織細胞完全裂解；
4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于貼壁細胞樣品：
1. 用PBS清洗細胞2-3次，最后一次徹底吸干殘留液。
2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例吸取IP裂解液于細胞培養板、瓶內，反復晃動培養板、瓶，使裂解液與細胞充分接觸3-5 min。
3. 用細胞刮刀將細胞刮下，收集到離心管中。
4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于懸浮細胞樣品：
1. 離心收集細胞。
2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例將細胞液與IP裂解液混合，振蕩。
3. 冰浴30 min，期間每10 min用移液器反復吹打數次，確保細胞完全裂解。
4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于細菌或真菌樣本：
1．取1 mL菌懸液，離心去上清，PBS洗滌一次，充分去除液體。渦旋使菌體盡量分散。
2．加入100-200 μL IP裂解液，輕輕渦旋使菌體與裂解液充分混勻。
3．冰浴10 min，期間每2 min用移液器反復吹打數次，確保菌體完全裂解。
4．12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
注意事項
1. 組織或細胞裂解時可能會出現粘稠狀。可用移液器反復吹打或渦旋儀振蕩，直至呈液狀為止。如果一直較稠，可再加入適量裂解液。
2. 本試劑不含有蛋白酶抑制劑，需自備蛋白酶抑制劑并在臨用前加入。
3. 本產品裂解得到的總蛋白溶液可兼容本公司的BCA蛋白定量檢測試劑盒。
4. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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