服務熱線
400-1016-218
聯系方式
- 手機：400-1016-218
- Q Q：355185756
- 郵箱：355185756@qq.com
- 地址：安徽省合肥市高新區黃山路602號合肥國家大學科技園A401室
產品詳情
操作說明
注意事項
產品簡介
RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統的細胞及組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解組織、細胞得到的蛋白樣品可以用于常規的PAGE、Western、免疫沉淀（immunol precipitation, IP）、免疫共沉淀（CO-IP）等實驗。RIPA裂解液有很多配方，按其裂解效果主要分為強，中，弱三種。本產品為RIPA強裂解液，其主要成分包含50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl，1 mM EDTA-2Na，1% Triton X-100，1%脫氧膽酸鈉及0.1% SDS。本產品適用于動物或植物組織及細胞樣品，也可用于真菌或細菌樣品。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；4℃避光保存，有效期18個月。
使用方法
自備蛋白酶抑制劑。RIPA裂解液（強）在臨用前需加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白降解。以下使用方法中提到的RIPA裂解液(強)均指已添加蛋白酶抑制劑。
對于組織樣品：
1. 組織塊用預冷PBS洗滌，去除血污，剪成細小碎塊置于勻漿器中。
2. 加入10倍組織體積RIPA裂解液(強)低溫勻漿。注意，RIPA裂解液(強)的使用量可按照約每50 mg組織與1 mL裂解液的比例添加。如組織蛋白含量較低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白濃度。
3. 將勻漿液轉移至1.5 mL離心管中，振蕩。冰浴30 min，期間用移液器反復吹打，確保組織細胞完全裂解；
4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于貼壁細胞樣品：
1. 用PBS清洗細胞2-3次，最后一次徹底吸干殘留液。
2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例吸取RIPA裂解液(強)于細胞培養板、瓶內，反復晃動培養板、瓶，使裂解液與細胞充分接觸3-5 min。
3. 用細胞刮刀將細胞刮下，收集到離心管中。
4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于懸浮細胞樣品：
1. 離心收集細胞。
2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例將細胞液與RIPA裂解液(強)混合，振蕩。
3. 冰浴30 min，期間每10 min用移液器反復吹打數次，確保細胞完全裂解。
4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于細菌或真菌樣本：
1．取1 mL菌懸液，離心去上清，PBS洗滌一次，充分去除液體。渦旋使菌體盡量分散。
2．加入100-200 μL RIPA裂解液(強)，輕輕渦旋使菌體與裂解液充分混勻。
3．冰浴10 min，期間每10 min用移液器反復吹打數次，確保菌體完全裂解。
4．12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
注意事項
1. 組織或細胞裂解時可能會出現粘稠狀。可用移液器反復吹打或渦旋儀振蕩，直至呈液狀為止。如果一直較稠，可再加入適量裂解液。
2. 本試劑不含有蛋白酶抑制劑，需自備蛋白酶抑制劑并在臨用前加入。
3. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。
產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產品均有嚴格的質量保證。如發現產品存在包裝規格疑問，請于收貨之日起七日內向我公司總部或當地辦事處提出，并請保證該產品，以備本公司進行核對檢驗。如果發現有質量問題，請于收貨后一月內保留產品50%以上的量，以便本公司回收產品進行質檢，確認產品質量。如逾期，則視為已經對本公司產品進行驗收。 聲明：如發生產品索賠事宜，本公司僅在產品價格范圍內酌情賠償，恕不接受超出產品價格范圍之賠償。客戶在使用過程中有任何技術問題可以撥打技術售后服務電話我們隨時給予解答。
合肥萬物生物科技有限公司
客服熱線：400-1016-218
QQ：355185756
地址：安徽省合肥市高新區黃山路602號合肥國家大學科技園A401室