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Calcein AM細胞活性檢測試劑盒（CCK-F）

價格：在線咨詢

貨號：

FKU0181

產品規(guī)格：

100 T

品牌：

萬物

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產品詳情操作說明注意事項

產品描述

Calcein AM是在Calcein（鈣黃綠素）的基礎上，引入了一個乙酰甲氧基甲酯（AM）基團，AM基團不僅掩蓋了Calcein螯合鈣的分子部分且增強了其疏水性，因此可以使Calcein AM輕易穿透活細胞膜，被細胞內源性酯酶剪切為Calcein。失去AM基團的Calcein不能輕易通過細胞膜，從而被滯留在細胞內；此外螯合鈣的分子部分被暴露出來，使得Calcein探針和活細胞內鈣離子結合，并發(fā)出較強綠色熒光。而死細胞缺乏酯酶，并不能使Calcein AM被水解成能Calcein，故無法標記死細胞。Calcein AM細胞毒性低，對細胞功能影響較小，如細胞增殖或淋巴細胞的趨化性等，是一款非常適用于活細胞染色的熒光探針。

本產品Calcein AM細胞活性檢測試劑盒也被稱為細胞熒光計數試劑盒（Cell Fluorescence Counting Kit，CCK-F），是通過Calcein AM熒光探針標記活細胞，來評判細胞的活性、毒性、增殖的檢測試劑盒。本試劑盒經過優(yōu)化和調試，不僅檢測靈敏度高、線性范圍寬，且只需要短時間的孵育，便可完成對細胞的檢測。操作簡單，不需要放射性同位素標記、也不需要結晶溶解等步驟，可減少實驗操作帶來的誤差，提高準確性和可重復性。

儲存與運輸

冰袋(wet ice)運輸；

操作步驟

1. Calcein AM檢測工作液配制：

根據96孔板每孔100 μL使用量，參考下表，將Calcein AM溶液和CCK-F檢測緩沖液按比例混合，配制成Calcein AM檢測工作液。

Component	10個樣品	50個樣品	100個樣品
Calcein AM溶液	10 μL	50 μL	100 μL
CCK-F檢測緩沖液	1 mL	5 mL	10 mL

2. 貼壁細胞檢測：

以下步驟主要對應96孔板檢測方案，其他孔板體系需視情況進行調整。

a. 細胞種板：將細胞按一定密度均勻接種于96孔板中，對其進行藥物或者其他前處理（接種密度由細胞的大小、生長速度等因素決定）；

b. （選做）細胞洗滌：吸取原培養(yǎng)基，用PBS緩沖液洗滌1-2次，減少血清、酚紅或者藥物對實驗結果的干擾；

c. 探針標記：去除細胞培養(yǎng)基或PBS緩沖液后，加入100 μL Calcein AM檢測工作液，于37℃避光孵育30 min；

d. （選做）細胞孵育：更換細胞培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育15-30 min，以確保細胞內Calcein AM充分水解；

e. 熒光檢測：使用酶標儀進行熒光讀數，Calcein AM探針最大激發(fā)光波長為501 nm，最大發(fā)射光波長為521 nm。細胞活性與熒光強度成正比。根據不同的實驗目的，也可進一步復染細胞核或使用其他儀器（例如熒光顯微鏡）檢測。

1. 懸浮細胞檢測：

a. 細胞接種：將細胞按一定密度均勻接種于24孔板中，對其進行藥物或者其他前處理（接種密度由細胞的大小、生長快慢等因素決定）；

b. （選做）細胞洗滌：1000 g離心3-5 min去除原培養(yǎng)基，用PBS緩沖液洗滌1-2次，每次需要1000 g離心3-5 min，以減少血清、酚紅或者藥物對實驗結果的干擾；

c. 探針標記：1000 g離心3-5 min后，去除細胞培養(yǎng)基或PBS緩沖液，加入適量Calcein AM檢測工作液，于37℃避光孵育30 min；

d. （選做）細胞孵育：更換細胞培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育15-30 min，以確保細胞內Calcein AM充分水解；

e. 熒光檢測：使用酶標儀或流式細胞儀對其進行熒光檢測，Calcein AM探針最大激發(fā)光波長為501 nm，最大發(fā)射光波長為521 nm。細胞活性與熒光強度成正比。根據不同的實驗目的，也可以進一步復染細胞核或用其他儀器（例如熒光顯微鏡）檢測。

注意事項

1. Calcein AM溶液在使用前進行短時離心，以減少試劑損失。

2. Calcein AM溶液避免反復凍融，收到產品后建議適當分裝，于-20℃避光密封保存。

3. Calcein AM在水溶液中不穩(wěn)定，Calcein AM檢測工作液需現配現用，24 h內有效。

4. 由于不同細胞狀態(tài)不同，Calcein AM檢測工作液孵育的時間和濃度可以視情況進行調整。

5. 使用酶標儀檢測熒光強度時，請使用黑色細胞培養(yǎng)板。

6. 熒光染料存在淬滅問題，請避光操作和存放。

7. 為了您的健康和安全，操作時請穿好實驗服、戴好手套。

本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！

凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產品均有嚴格的質量保證。如發(fā)現產品存在包裝規(guī)格疑問，請于收貨之日起七日內向我公司總部或當地辦事處提出，并請保證該產品，以備本公司進行核對檢驗。如果發(fā)現有質量問題，請于收貨后一月內保留產品50%以上的量，以便本公司回收產品進行質檢，確認產品質量。如逾期，則視為已經對本公司產品進行驗收。聲明：如發(fā)生產品索賠事宜，本公司僅在產品價格范圍內酌情賠償，恕不接受超出產品價格范圍之賠償。客戶在使用過程中有任何技術問題可以撥打技術售后服務電話我們隨時給予解答。

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