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產品詳情
操作說明
注意事項
產品描述
Calcein AM是在Calcein（鈣黃綠素）的基礎上，引入了一個乙酰甲氧基甲酯（AM）基團，AM基團不僅掩蓋了Calcein螯合鈣的分子部分且增強了其疏水性，因此可以使Calcein AM輕易穿透活細胞膜，被細胞內源性酯酶剪切為Calcein。失去AM基團的Calcein不能輕易通過細胞膜，從而被滯留在細胞內；此外螯合鈣的分子部分被暴露出來，使得Calcein探針和活細胞內鈣離子結合，并發出較強綠色熒光。而死細胞缺乏酯酶，并不能使Calcein AM被水解成能Calcein，故無法標記死細胞。Calcein AM細胞毒性低，對細胞功能影響較小，如細胞增殖或淋巴細胞的趨化性等，是一款非常適用于活細胞染色的熒光探針。
本產品Calcein AM細胞活性檢測試劑盒也被稱為細胞熒光計數試劑盒（Cell Fluorescence Counting Kit，CCK-F），是通過Calcein AM熒光探針標記活細胞，來評判細胞的活性、毒性、增殖的檢測試劑盒。本試劑盒經過優化和調試，不僅檢測靈敏度高、線性范圍寬，且只需要短時間的孵育，便可完成對細胞的檢測。操作簡單，不需要放射性同位素標記、也不需要結晶溶解等步驟，可減少實驗操作帶來的誤差，提高準確性和可重復性。
儲存與運輸
冰袋(wet ice)運輸；
-20℃保存，Calcein AM溶液需避光保存，并盡量避免反復凍融；12個月有效。
操作步驟
1. Calcein AM檢測工作液配制：
根據96孔板每孔100 μL使用量，參考下表，將Calcein AM溶液和CCK-F檢測緩沖液按比例混合，配制成Calcein AM檢測工作液。
|
Component |
10個樣品 |
50個樣品 |
100個樣品 |
|
Calcein AM溶液 |
10 μL |
50 μL |
100 μL |
|
CCK-F檢測緩沖液 |
1 mL |
5 mL |
10 mL |
2. 貼壁細胞檢測：
以下步驟主要對應96孔板檢測方案，其他孔板體系需視情況進行調整。
a. 細胞種板：將細胞按一定密度均勻接種于96孔板中，對其進行藥物或者其他前處理（接種密度由細胞的大小、生長速度等因素決定）；
b. （選做）細胞洗滌：吸取原培養基，用PBS緩沖液洗滌1-2次，減少血清、酚紅或者藥物對實驗結果的干擾；
c. 探針標記：去除細胞培養基或PBS緩沖液后，加入100 μL Calcein AM檢測工作液，于37℃避光孵育30 min；
d. （選做）細胞孵育：更換細胞培養基，繼續孵育15-30 min，以確保細胞內Calcein AM充分水解；
e. 熒光檢測：使用酶標儀進行熒光讀數，Calcein AM探針最大激發光波長為501 nm，最大發射光波長為521 nm。細胞活性與熒光強度成正比。根據不同的實驗目的，也可進一步復染細胞核或使用其他儀器（例如熒光顯微鏡）檢測。
1. 懸浮細胞檢測：
a. 細胞接種：將細胞按一定密度均勻接種于24孔板中，對其進行藥物或者其他前處理（接種密度由細胞的大小、生長快慢等因素決定）；
b. （選做）細胞洗滌：1000 g離心3-5 min去除原培養基，用PBS緩沖液洗滌1-2次，每次需要1000 g離心3-5 min，以減少血清、酚紅或者藥物對實驗結果的干擾；
c. 探針標記：1000 g離心3-5 min后，去除細胞培養基或PBS緩沖液，加入適量Calcein AM檢測工作液，于37℃避光孵育30 min；
d. （選做）細胞孵育：更換細胞培養基，繼續孵育15-30 min，以確保細胞內Calcein AM充分水解；
e. 熒光檢測：使用酶標儀或流式細胞儀對其進行熒光檢測，Calcein AM探針最大激發光波長為501 nm，最大發射光波長為521 nm。細胞活性與熒光強度成正比。根據不同的實驗目的，也可以進一步復染細胞核或用其他儀器（例如熒光顯微鏡）檢測。
注意事項
1. Calcein AM溶液在使用前進行短時離心，以減少試劑損失。
2. Calcein AM溶液避免反復凍融，收到產品后建議適當分裝，于-20℃避光密封保存。
3. Calcein AM在水溶液中不穩定，Calcein AM檢測工作液需現配現用，24 h內有效。
4. 由于不同細胞狀態不同，Calcein AM檢測工作液孵育的時間和濃度可以視情況進行調整。
5. 使用酶標儀檢測熒光強度時，請使用黑色細胞培養板。
6. 熒光染料存在淬滅問題，請避光操作和存放。
7. 為了您的健康和安全，操作時請穿好實驗服、戴好手套。
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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