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注意事項
細胞介紹
MV-4-11細胞系由Rovera課題組建立，來源于一名患有人雙表型髓性單核細胞白血病（biphenotypic B myelomonocytic leukemia）的10歲男孩的外周血。Interleukin (IL)-3可以獨立地支持該細胞長期生長，使用10%FBS培養時則不需要額外添加IL-3。但是，在IL-3和生長因子Granulocyte/Macrophage Colony-Stimulating Factor （GM-CSF）均處于低濃度的情況下，IL-3會抑制MV-4-11細胞的增殖。
1） 來源：男性，10歲 外周血
2） 形態：成淋巴細胞狀，懸浮生長
3） 含量：>1x10^6 細胞數
4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
1） 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備IMDM培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
備注：
a) 該細胞為懸浮細胞，傳代時使用【半換液法】對細胞狀態較為有利，因此我庫建議您使用【半換液法】進行傳代。如你收到的細胞為15ML離心管發貨的細胞，請不要通過離心的方式收集細胞，可以直接向培養瓶中添加等體積的新鮮培養液，然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養瓶中繼續培養即可。如你收到的細胞為T25培養瓶發貨的細胞，通過離心收集細胞后，添加8-10ml按照要求配置的新鮮培養液然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養瓶中繼續培養即可。
后續建議您使用【半換液法】進行傳代。
b) 細胞對血清質量較為敏感，我庫建議您使用進口大品牌優質血清進行培養。
c) 該細胞對細胞密度較為敏感，培養、傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍。細胞接種密度20萬個/mL ，培養時維持細胞密度在10萬-100萬個/mL
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 凍存細胞的復蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×10^5~1×10^6個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
下面T25瓶為例:
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
MV-4-11細胞系由Rovera課題組建立，來源于一名患有人雙表型髓性單核細胞白血病（biphenotypic B myelomonocytic leukemia）的10歲男孩的外周血。Interleukin (IL)-3可以獨立地支持該細胞長期生長，使用10%FBS培養時則不需要額外添加IL-3。但是，在IL-3和生長因子Granulocyte/Macrophage Colony-Stimulating Factor （GM-CSF）均處于低濃度的情況下，IL-3會抑制MV-4-11細胞的增殖。
生長因子Granulocyte Colony Stimulating Factor（G-CSF）會協同GM-CSF促進MV-4-11細胞的增殖，而單獨的G-CSF會短暫刺激該細胞系。據文獻[PubMed: 3500218]報道，間接免疫熒光法檢測髓性單核細胞抗原CD15，超過96%的該細胞為陽性，40~96%為單核細胞抗原CD4陽性，4-11%為單核細胞抗原CD10陽性。
1） 來源：男性，10歲 外周血
2） 形態：成淋巴細胞狀，懸浮生長
3） 含量：>1x10^6 細胞數
4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途：僅供科研使用。
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1） 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備IMDM培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
備注：
a) 該細胞為懸浮細胞，傳代時使用【半換液法】對細胞狀態較為有利，因此我庫建議您使用【半換液法】進行傳代。如你收到的細胞為15ML離心管發貨的細胞，請不要通過離心的方式收集細胞，可以直接向培養瓶中添加等體積的新鮮培養液，然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養瓶中繼續培養即可。如你收到的細胞為T25培養瓶發貨的細胞，通過離心收集細胞后，添加8-10ml按照要求配置的新鮮培養液然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養瓶中繼續培養即可。
后續建議您使用【半換液法】進行傳代。
b) 細胞對血清質量較為敏感，我庫建議您使用進口大品牌優質血清進行培養。
c) 該細胞對細胞密度較為敏感，培養、傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍。細胞接種密度20萬個/mL ，培養時維持細胞密度在10萬-100萬個/mL
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 凍存細胞的復蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×10^5~1×10^6個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
下面T25瓶為例:
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
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