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16S/ITS分型

來源:萬物生物   發布時間:2021-11-02

16S /ITS菌種鑒定

通過DNA 測序對微生物進行物種鑒定(菌種鑒定)是比傳統生化鑒定更先進的鑒定方法。DNA 測序不依賴菌種本身特點,對所有菌種均可使用。比傳統生化鑒定更加快速,準確。萬物生物提供的微生物物種鑒定服務包括細菌16s rDNA鑒定和真菌26s rDNA鑒定、真菌ITS和真菌18s 鑒定。

提供樣品

基因組DNA:濃度≥ 10 ng/μl,總體積≥ 20 μl,革蘭氏陽性細菌由于細胞壁較厚,最好提供基因組DNA;

帶有單菌落的平板或斜面:應長有至少分離三次以上的單菌落。

交付報告

PCR 產物照片;

菌種鑒定NCBI 參考結果;

測序彩色波形圖;

測序方向圖;

序列堿基圖。


16S DNA測序技術服務

技術原理

16S rDNA為編碼原核生物核糖體小亞基rRNA的DNA序列,具有10個保守區和9個高變區,其中保守區在細菌間差異不大,高變區具有屬或種的特異性,隨親緣關系不同而存在差異。16S rDNA擴增子測序,通常是選擇1-2個高變區,利用保守區設計通用引物進行PCR擴增,再對高變區進行測序分析和菌種鑒定。16S rDNA擴增子測序技術是研究環境樣品中微生物群落結構組成、挖掘樣品之間差異的重要手段。


16S rDNA結構示意圖


16S rDNA常用引物



實驗路線


為提高數據的利用效率,擴增子通常進行混樣建庫,為此需要在上下游引物的5’端加6-8個堿基的barcode序列,用于區分不同的樣品;PCR產物檢測合格后,等質量混合到一起,構建PCR-free文庫并上機測序。


技術路線




樣本要求




注:擴增子測序結果的準確性受DNA質量影響較大,所以前期樣本采集的過程一定要保證快速和低溫環境,提取過程也要確保DNA的完整性和提取量。


實驗周期 

樣本質檢合格后,22個工作日。


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