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產品詳情
操作說明
注意事項
產品簡介
本試劑盒為高靈敏度的兩步法免疫組化試劑盒，適用于一抗來源為小鼠的抗體的后續顯色。試劑盒中包含辣根過氧化物酶HRP偶聯標記的山羊抗小鼠IgG，本產品適用于小鼠來源的一抗，在IHC、Western blot實驗中，HRP標記的山羊抗小鼠二抗與小鼠來源一抗（先與抗原反應）結合后，再與DAB反應。DAB是辣根過氧化物酶（HRP）的底物，在HRP的催化下，DAB產生棕色沉淀，實現信號放大和顯色。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；二抗-20℃保存，DAB稀釋液和50×DAB原液4℃保存；有效期12個月。
準備工作
1. 自備PBS、細胞核復染試劑（推薦蘇木素染液G1004、蘇木素分化液G1039、蘇木素返藍液G1040）、梯度酒精、二甲苯、封片劑等。
2. 配制二抗工作液：將HRP標記山羊抗小鼠二抗用PBST（pH 7.2-7.4）以1:200比例稀釋，得到二抗工作液。現配現用，48 h內使用。
3. 配制DAB顯色工作液：每1 mL DAB稀釋液中加入20 μL 50×DAB原液，混勻備用。按需配制，現配現用。
操作步驟
1. 按照常規免疫組化步驟，組織切片經前期脫蠟、抗原修復、封閉、一抗孵育后，經PBS洗三次，每次5 min。
2. 二抗孵育：每張切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆蓋組織，室溫孵育30-60 min。經PBS洗三次，每次 5min。
3. DAB顯色：每張切片上滴加50-100 μL DAB工作液，室溫孵育數分鐘，通過顯微鏡下觀察控制顯色至預期效果，然后立即水洗終止顯色。
4. （可選）細胞核復染：切片經蘇木素染液染色3-5 min，自來水洗；經蘇木素分化液快速分化3-5 s，自來水洗；自來水沖洗返藍或經蘇木素返藍液返藍3-5 s。
5. 封片：切片按常規步驟經梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。
注意事項
1. 如果免疫組化顯色時出現背景過深，考慮延長洗滌時間，使用適當的封閉液進行封閉，滅活內源性過氧化氫酶，縮短顯色時間，降低二抗濃度等。如果沒有顯色或顯色太淺，可適當提高一抗、二抗濃度，延長顯色時間，其次檢測二抗是否被正常顯色。
2. DAB人體有害，操作時請小心，做好防護避免直接接觸人體或吸入體內。
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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